恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的,而普通基因擴(kuò)增儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段,熒光定量基因擴(kuò)增儀可以做普通基因擴(kuò)增儀的工作,而反之就不行了,況且這樣代價(jià)太大了,一般的實(shí)驗(yàn)室都不允許這樣做的??傊畠烧叩墓δ懿荒芑ハ嗳〈?。
普通基因擴(kuò)增儀只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。但是價(jià)格要低很多,而且運(yùn)行成本也要低很多。不過不能直接得到擴(kuò)增結(jié)果,還需要做電泳檢測(cè)。實(shí)際中檢測(cè)遺傳疾病,品種分子標(biāo)記篩選,甚至親自鑒定等都可以由普通基因擴(kuò)增儀完成。
但是,某些需要定量的實(shí)驗(yàn)就必須用到實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增儀了。比如檢測(cè)某些病原物的數(shù)量(血液乙肝病毒復(fù)制程度),特定基因的表達(dá)量(比如結(jié)合反轉(zhuǎn)錄做的RNA定量分析),某些基因在染色體組中拷貝數(shù)等等。熒光定量基因擴(kuò)增儀一般不需要對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析,操作相對(duì)簡(jiǎn)單些,但是耗材實(shí)在是貴。
簡(jiǎn)單來說,普通基因擴(kuò)增儀只能擴(kuò)增,不能檢測(cè),便宜。熒光定量基因擴(kuò)增儀除了擴(kuò)增,還能在擴(kuò)增的同時(shí)檢測(cè)DNA發(fā)出的熒光信號(hào),試劑和儀器都更貴。
恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀原理:
標(biāo)記有熒光素的TaqMan探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的TaqMan探針被切斷,熒光素游離于反應(yīng)體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng),通過實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度,求得CT值,同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照,即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。